Ny poizin'ny bibilava dia misy anzima izay mamadika ny fatoran'ny carboxyl ester.Ny substrate ho an'ny hydrolysis dia phospholipids, acetylcholine ary acetate aromatika.Ireo enzymes ireo dia misy karazany telo: phospholipase, acetylcholinesterase ary esterase aromatika.Arginine esterase ao amin'ny poizina bibilava dia afaka hydrolyze synthetic arginine na lysine, fa indrindra hydrolyzes proteinina peptide fatorana eo amin'ny natiora, noho izany dia an'ny protease.Ireo enzymes resahina eto dia miasa amin'ny substrate ester ihany ary tsy afaka miasa amin'ny fifamatorana peptide.Amin'ireo enzymes ireo, ny fiasan'ny biolojika amin'ny acetylcholinesterase sy ny phospholipase dia manan-danja kokoa ary efa nodinihina tanteraka.Ny poizin'ny bibilava sasany dia manana hetsika esterase aromatika matanjaka, izay afaka mamadika ny p-nitrophenyl ethyl ester, a - na P-naphthalene acetate ary indole ethyl ester.Mbola tsy fantatra na vokarin'ny anzima mahaleo tena na voka-dratsin'ny carboxylesterase io asa io, mainka fa ny lanjany biolojika.Rehefa nihetsika tamin'ny p-nitrophenyl ethyl ester sy indole ethyl ester ny poizin'ny Agkistrodon halys Japonicus dia tsy hita ny hydrolysates an'ny p-nitrophenol sy indole phenol;Mifanohitra amin'izany kosa, raha mamaly amin'ny poizina bibilava zana-karazan'ny cobra Zhoushan sy poizina bibilava Bungarus multicinctus ireo estera ireo, dia ho voahidy haingana izy ireo.Fantatra fa manana hetsika cholinesterase mahery vaika ireo poizina kôbra ireo, izay mety ho tompon'andraikitra amin'ny hydrolysis ireo substrate etsy ambony.Raha ny marina, Mclean et al.(1971) dia nitatitra fa maro ny poizin'ny bibilava an'ny fianakaviana Cobra dia afaka manondraka ny ethyl ester indole, ny ethyl ester naphthalene ary ny ester butyl naphthalene.Ireo poizin'ny bibilava ireo dia avy amin'ny: kôbra, kôbra mainty tenda, kôbra mainty molotra, kôbra volamena, kôbra ejipsianina, kôbra kôbra, kôbra volamena mamba, mamba mainty ary mamba molotra fotsy (D. aw mbola mahafantatra bibilava rhombola atsinanana.
Ny poizina bibilava dia afaka manondraka ny methyl indole ethyl ester, izay substrate hamaritana ny asan'ny cholinesterase amin'ny serum, fa ity poizina bibilava ity dia tsy mampiseho hetsika cholinesterase.Izany dia mampiseho fa misy esterase tsy fantatra ao amin'ny poizina kôbra, izay tsy mitovy amin'ny cholinesterase.Mba hahatakarana ny toetoetran'io enzyme io dia ilaina ny asa fanasarahana fanampiny.
1, Phospholipase A2
(I) Overview
Phospholipase dia anzima izay afaka hydrolyze glyceryl phosphate.Misy karazany 5 ny phospholipase eo amin'ny natiora, dia ny phospholipase A2 sy ny phospholipase.
A., phospholipase B, phospholipase C ary phospholipase D. Ny poizin'ny bibilava dia misy phospholipase A2 (PLA2) indrindra, misy poizina bibilava vitsivitsy misy phospholipase B, ary ny phospholipase hafa dia hita indrindra amin'ny vatan'ny biby sy ny bakteria.Ny sary 3-11-4 dia mampiseho ny toerana fiasan'ireo phospholipases amin'ny hydrolysis substrate.
Anisan'ireo phospholipases, ny PLA2 dia nodinihina bebe kokoa.Mety ho anzima be fianarana indrindra amin'ny poizina bibilava izy io.Ny substrate dia ny fatorana ester amin'ny toerana faharoa amin'ny Sn-3-glycerophosphate.Ity enzyme ity dia hita be dia be ao amin'ny poizina bibilava, poizina tantely, poizina maingoka ary tavy biby, ary ny PLA2 dia be dia be amin'ny poizina bibilava fianakaviana efatra.Satria io enzyme io dia manapaka ny liomena ary miteraka hemolysis, dia antsoina koa hoe "hemolysin".Ny olona sasany dia miantso PLA2 hemolytic lecithinase.
Hitan'i Ludeeke voalohany fa ny poizin'ny bibilava dia afaka mamokatra fitambarana hemolytic amin'ny alàlan'ny fiasan'ny lecithin amin'ny alàlan'ny enzymes.Taty aoriana, Delezenne et al.dia nanaporofo fa rehefa miasa amin'ny serum na yolk soavaly ny poizin'ny kôbra, dia mamorona zavatra hemolytika izy io.Fantatra izao fa ny PLA2 dia afaka miasa mivantana amin'ny phospholipids amin'ny erythrocyte membrane, manimba ny firafitry ny erythrocyte membrane ary miteraka hemolysis mivantana;Afaka miasa amin'ny serum na manampy lecithin ihany koa izy mba hamokarana lecithin hemolytic, izay miasa amin'ny sela mena mba hamokarana hemolysis ankolaka.Na dia betsaka aza ny PLA2 ao amin'ireo fianakaviana efatra misy poizina bibilava, dia hafa kely ny votoatin'ny enzymes ao amin'ny poizina bibilava isan-karazany.Rattlesnake (C
Ny poizin'ny bibilava dia nampiseho hetsika PLA2 malemy.Ny tabilao 3-11-11 dia mampiseho ny fampitahana ny asan'ny PLA2 amin'ny poizina lehibe 10 amin'ny bibilava misy poizina ao Shina.
Tabilao 3-11-11 Fampitahana ny hetsika phospholipase VIII amin'ny poizina bibilava 10 any Sina
Poizina bibilava
Famotsorana tavy
asidra alifatika,
Cjumol/mg)
Hemolytika CHU50/^ g * ml)
Poizina bibilava
Alefaso ny asidra matavy
(^raol/mg)
Hemolytika “(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
iraika ambin'ny folo
Micracephal ophis
dimy isa iray aotra
kalyspallas
8. 68
valon-jato amby roa arivo
gracilis
V, acutus
7. 56
** #
Ophiophagus hannah
telo isa valo roa
efapolo amby zato
Bnugarus fasctatus
7,56
valopolo amby roan-jato
B. multicinctus
iray isa sivy enina
valopolo amby roan-jato
Viper sy russelli
fito isa aotra telo
T, mucrosquamatus
iray isa valo dimy
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Fisarahana sy fanadiovana
Ny votoatin'ny PLA2 amin'ny poizina bibilava dia lehibe, ary miorina amin'ny hafanana, asidra, alkali ary denaturant, ka mora ny manadio sy manasaraka ny PLA2.Ny fomba mahazatra dia ny fanaovana filtration gel amin'ny poizina crude aloha, avy eo manatanteraka chromatography fifanakalozana ion, ary azo averina ny dingana manaraka.Tsara homarihina fa ny fanamainana ny PLA2 aorian'ny chromatography fifanakalozana ion dia tsy tokony hiteraka aggregation, satria ny dingana fanamainana mangatsiaka matetika dia mampitombo ny tanjaky ny ionic ao amin'ny rafitra, izay antony lehibe mahatonga ny fanangonana ny PLA2.Ho fanampin'ireo fomba fanao etsy ambony ireo, dia noraisina ihany koa ireto fomba manaraka ireto: ① Wells et al.② Ny analogue substrate an'ny PLA2 dia nampiasaina ho ligand ho an'ny chromatography affinity.Ity ligand ity dia afaka mifatotra amin'ny PLA2 amin'ny poizina bibilava miaraka amin'ny Ca2 +.Ny EDTA dia matetika ampiasaina ho eluent.Rehefa nesorina ny Ca2 + dia mihena ny fifandraisana misy eo amin'ny PLA2 sy ny ligand, ary mety hisaraka amin'ny ligand izany.Ny hafa mampiasa vahaolana organika 30% na urea 6mol/L ho eluent.③ Ny chromatography hydrophobic dia natao tamin'ny PheiiylSephar0SeCL-4B mba hanesorana ny PLA2 amin'ny cardiotoxine.④ Ny antibody anti-PLA2 dia nampiasaina ho ligand hanaovana chromatography affinity amin'ny PLA2.
Hatreto dia betsaka ny poizina bibilava PLAZ no nodiovina.Tu et al.(1977) dia nanao lisitra PLA2 voadio tamin'ny poizina bibilava talohan'ny 1975. Tao anatin'ny taona vitsivitsy, lahatsoratra marobe momba ny fisarahana sy ny fanadiovana ny PLA2 no notaterina isan-taona.Eto isika dia mifantoka amin'ny fisarahana sy ny fanadiovana ny PLA ataon'ny manam-pahaizana Shinoa.
Chen Yuancong et al.(1981) dia nanasaraka karazana PLA2 telo tamin'ny poizina Agkistrodon halys Pallas ao Zhejiang, izay azo zaraina ho PLA2 asidra, tsy miandany ary alkaline araka ny teboka isoelektrik'izy ireo.Araka ny poizina, ny tsy miandany PLA2 dia misy poizina kokoa, izay fantatra ho presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin.Ny alkaline PLA2 dia tsy dia misy poizina, ary ny PLA2 asidra dia saika tsy misy poizina.Wu Xiangfu et al.(1984) dia nampitaha ny toetran'ny PLA2 telo, anisan'izany ny lanjan'ny molekiola, ny fitambaran'ny asidra amine, ny N-terminal, ny teboka isoelektrika, ny fahamarinan-toerana mafana, ny asan'ny enzyme, ny poizina ary ny hetsika hemolytika.Nasehon'ny vokatra fa nitovy ny lanjan'ny molekiola sy ny fahamarinan-toerana mafana, saingy nisy fahasamihafana lehibe teo amin'ny lafiny hafa.Amin'ny lafiny fiasan'ny enzyme, ny asan'ny enzyme asidra dia ambony noho ny asan'ny enzyme alkaline;Ny voka-dratsin'ny enzyme alkaline amin'ny sela mena voalavo no mahery indrindra, arahin'ny enzyme tsy miandany, ary ny enzyme asidra zara raha hemolyzed.Noho izany dia heverina fa ny fiantraikan'ny hemolytic an'ny PLAZ dia mifandraika amin'ny fiampangana ny molekiola PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) dia nanao kristaly Agkistrodotoxin.Tu Guangliang et al.(1983) dia nitatitra fa ny PLA misy poizina miaraka amin'ny teboka isoelektrika 7. 6 dia natokana sy nodiovina tamin'ny poizin'ny Vipera rotundus avy amin'ny Fujian, ary ny toetra ara-batana sy simika, ny asidra amine ary ny filaharan'ny asidra amine 22 ao amin'ny N. - nofaritana ny terminal.Li Yuesheng et al.(1985) mitoka-monina sy manadio PLA2 hafa amin'ny poizina Viper rotundus ao Fujian.Ny subunit ny PLA2 * dia 13 800, ny teboka isoelectric dia 10.4, ary ny hetsika manokana dia 35 / xnioI / miri mg. Miaraka amin'ny lecithin ho substrate, ny pH tsara indrindra amin'ny enzyme dia 8.0 ary ny mari-pana tsara indrindra dia 65 ° C. LD5 tsindrona tsindrona amin'ny totozy.Izany dia 0,5 ± 0,12mg/kg.Ity anzima ity dia manana fiantraikany anticoagulant sy hemolytic mazava.Ny molekiola PLA2 misy poizina dia misy sisa 123 amin'ny karazana asidra amine 18.Ny molekiola dia manan-karena amin'ny cysteine (14), aspartic acid (14) ary glycine (12), saingy tsy misy afa-tsy methionine iray, ary ny N-terminal dia serine residues.Raha ampitahaina amin'ny PLA2 mitoka-monina amin'ny Tuguang, ny lanjan'ny molekiola sy ny isan'ny asidra amine sisa tavela amin'ny isoenzymes roa dia tena mitovy, ary ny fitambaran'ny asidra amine dia tena mitovy, fa ny isan'ny aspartic asidra sy ny proline residues dia somary hafa.Ny poizin'ny bibilava mpanjaka Guangxi dia misy PLA2 manankarena.Shu Yuyan et al.(1989) dia nanasaraka ny PLA2 avy amin'ny poizina, izay manana hetsika manokana 3.6 heny noho ny poizina tany am-boalohany, ny lanjan'ny molekiola 13000, ny fitambaran'ny asidra amine 122, ny teboka isoelektrika 8.9, ary ny fitoniana mafana tsara.Avy amin'ny fandinihana mikraoskaopy elektronika momba ny fiantraikan'ny PLA2 fototra amin'ny sela mena, dia hita fa misy fiantraikany miharihary eo amin'ny sela mena ny olombelona, fa tsy misy fiantraikany mazava amin'ny sela mena osy.Ity PLA2 ity dia misy fiantraikany miharihary amin'ny fahatarana amin'ny hafainganam-pandehan'ny sela mena amin'ny olombelona, osy, bitro ary kisoa guinea.Chen et al.Ity anzima ity dia afaka manakana ny fivondronan'ny platelet atosiky ny ADP, collagen ary ny sodium arachidonic acid.Rehefa 10/xg/ml~lOOjug/ml ny fatran'ny PLA2, dia voasakana tanteraka ny fitambaran'ny platelet.Raha ampiasaina ho fitaovana ny platelets voasasa, dia tsy afaka manakana ny fanangonana ny PLA2 amin'ny fifantohana amin'ny 20Mg / ml.Ny aspirinina dia inhibitor ny cyclooxygenase, izay afaka manakana ny fiantraikan'ny PLA2 amin'ny platelets.Ny PLA2 dia mety manakana ny fivondronan'ny platelet amin'ny alàlan'ny hydrolyzing asidra arachidonic mba hamoronana thromboxane A2.Ny fampifanarahana ny vahaolana amin'ny PLA2 novokarin'ny poizina Agkistrodon halys Pallas ao amin'ny faritanin'i Zhejiang dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny dichroism boribory, ny fluorescence ary ny fitrandrahana UV.Ny valin'ny fanandramana dia naneho fa ny fiovaovan'ny rojo an'ity anzima ity dia mitovy amin'ny an'ny karazana anzima hafa avy amin'ny karazana sy ny genera hafa, ny fiovan'ny taolam-paty dia nanana fanoherana tsara ny hafanana, ary ny fiovan'ny rafitra amin'ny tontolo asidra dia azo averina.Ny fampifangaroana ny activator Ca2 + sy ny enzyme dia tsy misy fiantraikany amin'ny tontolo iainana amin'ny sisa tavela tryptophan, fa ny inhibitor Zn2 + dia manao ny mifanohitra amin'izany.Tsy mitovy amin'ireo reagents voalaza etsy ambony ny sandan'ny pH amin'ny vahaolana.
Ao anatin'ny dingan'ny fanadiovana PLA2 ny poizin'ny bibilava, ny fisehoan-javatra miharihary dia ny fisian'ny poizin'ny bibilava misy tampon'ny elution PLA2 roa na maromaro.Ity tranga ity dia azo hazavaina toy izao manaraka izao: ① noho ny fisian'ny isozymes;② Ny karazana PLA2 iray dia polymerized amin'ny fangaro PLA2 isan-karazany amin'ny lanja molekiola isan-karazany, ny ankamaroany dia ao anatin'ny 9 000 ~ 40 000;③ Manasarotra ny PLA2 ny fitambaran'ny PLA2 sy ny poizin'ny bibilava hafa;④ Satria ny fatorana amida ao amin'ny PLA2 dia hydrolyzed, miova ny fiampangana.① Ary ② dia mahazatra, miaraka amin'ny maningana vitsivitsy, toy ny PLA2 amin'ny poizina bibilava CrWa/w
Misy toe-javatra roa: ① sy ②.Ny fepetra fahatelo dia hita ao amin'ny PLA2 amin'ny poizina amin'ireto bibilava manaraka ireto: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, viper Palestiniana, viper fasika, ary bibilava mahatsiravina km.
Ny vokatry ny tranga ④ dia manova ny hafainganam-pandehan'ny fifindra-monina PLA2 mandritra ny electrophoresis, saingy tsy miova ny fitambaran'ny asidra amine.Ny peptide dia mety ho tapaka amin'ny hydrolysis, saingy amin'ny ankapobeny dia mbola mifamatotra amin'ny fatorana disulfida izy ireo.Ny poizin'ny bibilava atsinanana dia misy endrika roa PLA2, antsoina hoe karazana a sy karazana p PLA2 tsirairay avy.Ny fahasamihafana misy eo amin'ireo karazana PLA2 roa ireo dia asidra amine iray ihany, izany hoe, ny glutamine amin'ny molekiola PLA2 iray dia nosoloina asidra glutamika ao amin'ny molekiola PLA2 hafa.Na dia tsy mazava aza ny tena antony mahatonga an'io fahasamihafana io, dia inoana fa misy ifandraisany amin'ny fanafoanana ny PLA2 izany.Raha atao mafana miaraka amin'ny poizina tsy misy poizina ny PLA2 ao amin'ny poizin'ny viper Palestiniana, dia ho lasa mihoatra noho ny teo aloha ny vondrona farany ao amin'ny molekiolany anzima.Avy amin'ny C PLA2 mitoka-monina amin'ny poizina bibilava dia manana N-terminal roa samy hafa, ary ny lanjan'ny molekiola dia 30000. Ity trangan-javatra ity dia mety ho vokatry ny dimer asymmetrika ny PLA2, izay mitovy amin'ny dimer symmetrika noforonin'ny PLA2 ao amin'ny poizina avy amin'ny bibilava diamondra atsinanana. ary bibilava diamondra tandrefana.Ny kôbra aziatika dia ahitana karazana subspesies maro, ny sasany amin'izy ireo dia tsy dia voafaritra loatra amin'ny fanasokajiana.Ohatra, fantatra ankehitriny ilay antsoina hoe Cobra Outer Caspian
Tokony ho lazaina amin'ny Cobra Outer Caspian Sea izy io.Satria misy subspecies maro ary mifangaro miaraka, ny firafitry ny poizina bibilava dia miovaova be noho ny loharano samihafa, ary avo ihany koa ny votoatin'ny isozymes PLA2.Ohatra, poizina cobra
Farafahakeliny 9 karazana isozymes PLA2 amin'ny karazana r ^ ll no hita tao, ary karazana isozymes PLA2 7 no hita tao amin'ny poizin'ny subspecies Caspienne.Durkin et al.(1981) dia nandinika ny votoatin'ny PLA2 sy ny isan'ny isozymes amin'ny poizina bibilava samihafa, anisan'izany ny poizina kôbra 18, poizina mamba 3, poizina viper 5, poizina bibilava 16 ary poizina bibilava 3 an-dranomasina.Amin'ny ankapobeny, ny hetsika PLA2 amin'ny poizina kôbra dia avo, miaraka amin'ny isozymes maro.Ny hetsika PLA2 sy ny isozymes amin'ny poizina viper dia antonony.Ny hetsika PLA2 amin'ny poizina mamba sy poizina bibilava dia tena ambany na tsy misy hetsika PLA2.Ny asan'ny PLA2 amin'ny poizina bibilava dia ambany ihany koa.
Tao anatin'ny taona vitsivitsy izay, tsy voalaza fa ny PLA2 ao amin'ny poizina bibilava dia misy amin'ny endrika dimer mavitrika, toy ny tatsinanana rhombophora rattlesnake (C. poizina bibilava misy karazana a sy karazana P PLA2, izay samy ahitana subunits roa mitovy. , ary ny dimerase ihany no manana
Activity.Shen et al.dia nanolo-kevitra ihany koa fa ny dimer PLA2 amin'ny poizina bibilava ihany no endrika mavitrika amin'ny enzyme.Ny fandinihana ny firafitry ny habakabaka dia manaporofo ihany koa fa ny PLA2 amin'ny bibilava diamondra tandrefana dia misy amin'ny endrika dimer.Piscivorous fitambarana
Misy roa samy hafa PLA ^ Ei sy E2 amin'ny poizin'ny bibilava, izay misy 仏 amin'ny endriky ny dimer, ny dimer dia mavitrika, ary ny monomera misaraka dia tsy mavitrika.Lu Yinghua et al.(1980) dia nandinika bebe kokoa ny toetra ara-batana sy simika ary kinetika fanehoan-kevitr'i E. Jayanthi et al.(1989) dia nanasaraka ny PLA2 fototra (VRVPL-V) tamin'ny poizina viper.Ny lanjan'ny molekiola amin'ny monomer PLA2 dia 10000, izay misy fiantraikany mahafaty, anticoagulant ary edema.Ny anzima dia afaka polymerize polymer amin'ny samy hafa lanja molekiola eo ambanin'ny fepetra PH 4.8, ary ny ambaratongam-polymerization sy ny molekiola lanjan'ny polymers mitombo amin'ny fitomboan'ny mari-pana.Ny lanjan'ny molekiola amin'ny polymère vokarina amin'ny 96 ° C dia 53 100, ary ny hetsika PLA2 an'io polymère io dia mitombo roa.
Fotoana fandefasana: Nov-18-2022